一、实验室菌株保存的核心目标

1．长期存活：维持菌种代谢停滞，减少遗传变异 

2．防止污染：杜绝杂菌入侵 

3．便捷取用：快速复活且性状稳定 

二、5大常见保存方法 

1．斜面低温保存法

【原理】利用低温（4℃）减缓代谢，固体培养基短期维持菌种活性

【操作步骤】接种至斜面培养基→培养至菌苔丰满→封口膜密封→4℃保存

【保存时间】1~3个月（细菌）；3~6个月（真菌）

【优点】成本低、操作简单、无需特殊设备

【缺点】易污染、保存期短、频繁传代易变异

【适用场景】短期实验或菌种日常使用

2．液体石蜡覆盖法

【原理】石蜡隔绝氧气，抑制代谢并防止培养基干燥

【操作原理】斜面培养菌种→无菌石蜡覆盖斜面→直立放置→4℃保存

【保存时间】6~12个月

【优点】延长斜面保存期，适合不产孢子的微生物

【缺点】取菌时易污染，石蜡易燃需谨慎操作

【适用场景】放线菌、酵母菌等非严格厌氧菌的中期保存 

3．甘油管冷冻保存法

【原理】甘油作为冷冻保护剂，-80℃超低温抑制细胞损伤

【操作步骤】菌液与40%甘油等体积混合→分装至冻存管→-80℃保存

【保存时间】1~2年（细菌）；5年以上（真菌）

【优点】复活率高（＞90%）、操作标准化、适合高通量保存

【缺点】依赖-80℃冰箱，断电风险需备份

【适用场景】大肠杆菌、酵母等常用模式菌的长期保存 

4．冷冻干燥（冻干）保存法

【原理】真空条件下升华脱水，使微生物进入休眠状态

【操作步骤】菌液与保护剂（如脱脂奶）混合→预冻→真空干燥→封口

【保存时间】5~10年甚至更久

【优点】保存期长、稳定性高、便于运输

【缺点】设备昂贵（冻干机）、操作复杂、部分菌种存活率低

【适用场景】专利菌株、标准菌种库的永久保存

5．液氮超低温保存法

【原理】-196℃液氮彻底终止代谢，细胞进入“假死”状态

【操作步骤】菌液与冷冻保护剂（如DMSO）混合→程序降温→投入液氮罐

【保存时间】10年以上

【优点】保存期最长、遗传稳定性最佳

【缺点】液氮补充成本高、操作危险（冻伤、爆炸风险）

【适用场景】珍稀菌种、细胞系或遗传工程菌的终极保存

五大方法对比

三、如何选择最佳保存方案

1. 根据保存目的

(1) 日常使用：斜面低温+甘油管备份

(2) 长期保种：冻干+液氮双保险

(3) 菌种交换：冻干粉（无需冷链运输） 

2. 根据实验室条件

(1) 预算有限：优先甘油管法（-80℃冰箱普及率高）

(2) 无超低温设备：液体石蜡覆盖法延长斜面保存期 

3. 根据菌种特性

(1) 产孢子菌（如芽孢杆菌）：冻干保存效果极佳

(2) 厌氧菌：避免液体石蜡法（氧气残留），改用甘油管+厌氧袋 

四、菌株保存常见问题及建议 

1．污染：保存前严格纯化，添加抗生素（如放线菌酮抑制真菌） 

2．失活：优化保护剂（如海藻糖提升冻存存活率） 

3．标签脱落：适用耐低温油性笔，电子数据库备份信息

文章出自：验外实包   想了解更多请关注：http://www.dj-cro.com/